apoC-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419163

Panoramica

Apoc1 codifica l’apolipoproteina C-I (apoC-I), una piccola apolipoproteina secreta che si associa alle particelle HDL e VLDL e modula il trasporto dei lipidi e il rimodellamento delle lipoproteine. Nei topi, apoC-I influenza l’equilibrio tra la rimozione delle lipoproteine ricche di trigliceridi e il traffico del colesterolo, agendo sulle interazioni con i recettori e sui processi dipendenti dalle lipasi all’interno della via delle lipoproteine circolanti. L’espressione di Apoc1 è arricchita nelle cellule della linea macrofagica e può modellare programmi di segnalazione dell’immunità innata legati alla gestione dei lipidi. Un’alterata biologia di APOC1 è stata collegata a infiammazione rilevante per l’aterosclerosi, dislipidemia metabolica e contesti neuroinfiammatori, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici di immunometabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apoc1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apoc1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apoc1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoC-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apoc1 per lo studio della segnalazione di apoC-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apoc1 critici per la funzione di apoC-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apoc1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoC-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoC-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apoc1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoC-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoC-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apoc1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apoc1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.