Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400229-ACT

AGTR1 codifica il recettore dell’angiotensina II di tipo 1 (AT1), un GPCR a sette domini transmembrana che media la maggior parte della segnalazione canonica dell’angiotensina II nei tessuti cardiovascolari e renali. Dopo il legame con il ligando, AT1 si accoppia prevalentemente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, la mobilizzazione del calcio e la PKC, e può coinvolgere anche le vie MAPK/ERK, JAK/STAT, i percorsi di produzione di ROS e la segnalazione dipendente da β-arrestina, che modula la desensibilizzazione del recettore e il suo traffico. Queste cascate regolano la vasocostrizione, la secrezione di aldosterone, l’omeostasi di sodio e acqua, il rimodellamento vascolare, l’infiammazione e la fibrosi. Un’attività e un’espressione deregolate di AGTR1 sono state implicate nell’ipertensione, nell’ipertrofia cardiaca, nei processi aterosclerotici e nel rimodellamento associato alla malattia renale cronica, rendendolo un nodo ampiamente studiato nella biologia della via del RAAS.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AGTR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AGTR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AGTR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AGTR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 nelle cellule tumorali con espressione di AGTR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.