ADK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419008

Panoramica

Adk nel topo codifica l’adenosina chinasi (ADK), un enzima citosolico chiave che fosforila l’adenosina in AMP e contribuisce a mantenere l’omeostasi dell’adenosina e le riserve di nucleotidi dell’adenina. Regolando i livelli intracellulari ed extracellulari di adenosina, ADK influenza la segnalazione purinergica, il metabolismo energetico e il potenziale di metilazione attraverso effetti sul ciclo S-adenosilmetionina/S-adenosilomocisteina. L’attività di ADK è collegata al controllo delle risposte cellulari allo stress e della segnalazione infiammatoria, e un metabolismo dell’adenosina alterato è stato associato, in modelli sperimentali, a disfunzioni neurologiche, suscettibilità alle crisi epilettiche e contesti di danno tissutale. In quanto regolatore metabolico (“gatekeeper”), ADK è spesso studiata in vie che collegano il recupero dei nucleotidi (nucleotide salvage), la regolazione epigenetica e l’adattamento immunometabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adk per lo studio della segnalazione di ADK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adk critici per la funzione di ADK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.