Adenosine A1-R Plasmide Double Nickase (h): sc-401241-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Adenosine A1-R Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Adenosine A1-R Double Nickase Plasmid (h) e il Adenosine A1-R Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADORA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Adenosine A1-R Antibody (D-5): sc-514337
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Adenosine A1-R Plasmide Double Nickase (h) | sc-401241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenosine A1-R Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADORA1 codifica il recettore umano dell’adenosina A1 (Adenosine A1-R), un GPCR accoppiato a Gi/o che rileva l’adenosina extracellulare per modulare il cAMP intracellulare, l’attività dei canali ionici e la segnalazione MAPK. L’attivazione di A1-R in genere attenua il rilascio di neurotrasmettitori e influenza l’eccitabilità cellulare, l’omeostasi metabolica e le risposte all’ipossia e all’infiammazione attraverso reti di segnalazione purinergica. La segnalazione di ADORA1 interseca le vie dell’adenilato ciclasi/PKA e può modellare programmi trascrizionali a valle tramite ERK e cascate chinasiche correlate. Un’alterazione del tono adenosina–A1-R è stata implicata in diversi processi rilevanti per la malattia, tra cui l’eccitabilità neurologica, le risposte allo stress legate all’ischemia e la regolazione dell’infiammazione, a supporto di studi meccanicistici in neurobiologia e immunometabolismo.
Adenosine A1-R Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADORA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADORA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADORA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADORA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.