ADAMDEC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405515-ACT

ADAMDEC1 codifica una metalloproteasi secreta della famiglia ADAM (a disintegrin and metalloprotease), che contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare e alla regolazione della proteolisi pericellulare. È associata prevalentemente ai compartimenti immunitari mieloidi e mucosali, dove è stata collegata alla segnalazione infiammatoria, alla differenziazione dei leucociti e ai processi di sorveglianza tissutale. Attraverso la modulazione del microambiente extracellulare, ADAMDEC1 può influenzare la migrazione cellulare, le dinamiche di adesione e le vie responsivi alle citochine che plasmano le risposte immunitarie locali. Un’espressione alterata di ADAMDEC1 è stata riportata in studi sull’infiammazione gastrointestinale, sulla biologia del microambiente tumorale e sull’infiltrazione immunitaria, a supporto del suo valore come parametro molecolare in immunologia e nella ricerca sul cancro.

ADAMDEC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAMDEC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAMDEC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAMDEC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAMDEC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAMDEC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAMDEC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAMDEC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAMDEC1 nelle cellule tumorali con espressione di ADAMDEC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.