ACSVL6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405327-ACT

SLC27A5 codifica ACSVL6, una sintetasi acil-CoA per acidi grassi a catena molto lunga che catalizza l’attivazione, dipendente dall’ATP, di acidi grassi a catena lunga e molto lunga in tioesteri acil-CoA, un passaggio chiave che regola l’utilizzo degli acidi grassi. Controllando la disponibilità di acil-CoA, ACSVL6 influenza processi di gestione dei lipidi tra cui la β-ossidazione, il rimodellamento dei trigliceridi e, più in generale, il flusso metabolico attraverso le vie di sintesi e degradazione lipidica. Alterazioni dell’attivazione degli acidi grassi e del metabolismo degli acil-CoA sono associate a una deregolazione dell’omeostasi lipidica, con rilevanza per stati di stress metabolico che coinvolgono vie centrate sul fegato e l’equilibrio energetico sistemico. Di conseguenza, SLC27A5 è spesso studiato in relazione al metabolismo lipidico, all’adattamento energetico cellulare e alla segnalazione associata alle malattie metaboliche.

ACSVL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC27A5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACSVL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC27A5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC27A5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACSVL6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC27A5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACSVL6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACSVL6 nelle cellule tumorali con espressione di SLC27A5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.