ACSVL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405122-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACSVL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h) e il ACSVL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC27A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACSVL1 Antibody (D-7): sc-393906
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACSVL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSVL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC27A2 codifica l’acil-CoA sintetasi per acidi grassi a catena molto lunga 1 (ACSVL1/FATP2), un enzima associato alla membrana che attiva gli acidi grassi a catena lunga e molto lunga in tioesteri acil-CoA, consentendone l’instradamento verso la β-ossidazione, la sintesi di lipidi complessi e il rimodellamento lipidico. Controllando l’assorbimento degli acidi grassi e la loro attivazione intracellulare, ACSVL1 influenza il metabolismo lipidico mitocondriale e perossisomiale, l’omeostasi energetica e le risposte cellulari alla disponibilità di nutrienti. Una gestione disregolata degli acidi grassi che coinvolge SLC27A2 è stata studiata in fenotipi metabolici quali la steatosi epatica e la resistenza all’insulina, nonché in programmi di metabolismo lipidico alterati rilevanti per l’infiammazione e la bioenergetica delle cellule tumorali. Queste proprietà rendono ACSVL1 un nodo utile per analizzare la segnalazione guidata dai lipidi e la riprogrammazione metabolica in modelli cellulari umani.
ACSVL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC27A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC27A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC27A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC27A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.