ACOX1 Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-418948-ACT-2

Il gene murino Acox1 codifica l’acil-CoA ossidasi 1 (ACOX1), una flavoproteina perossisomiale che catalizza la prima fase e quella limitante la velocità della β-ossidazione degli acil-CoA di acidi grassi a catena lineare, generando trans-2-enoil-CoA e contribuendo al catabolismo lipidico dipendente dai perossisomi. L’attività di ACOX1 sostiene l’omeostasi cellulare dei lipidi e dell’energia e si intreccia con la biogenesi dei perossisomi, la regolazione dello stress ossidativo attraverso la produzione di H2O2 e reti di segnalazione metabolica come i programmi trascrizionali guidati da PPAR. La deregolazione di Acox1 è associata ad alterazioni del turnover degli acidi grassi a catena molto lunga, accumulo lipidico epatico, infiammazione e fenotipi più ampi del metabolismo perossisomiale, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi della steatosi epatica e del rimodellamento metabolico. L’editing genetico o altre perturbazioni genetiche di Acox1 nel topo sono utili per analizzare le vie della β-ossidazione perossisomiale, le firme lipidomiche e le conseguenze specifiche d’organo o di tipo cellulare della disfunzione dei perossisomi in modelli di ricerca biomedica.

ACOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Acox1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Acox1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Acox1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACOX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Acox1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACOX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACOX1 nelle cellule tumorali con espressione di Acox1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.