Abin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425441-ACT

Il gene murino Tnip1 codifica ABIN-1 (A20-binding inhibitor of NF-κB), un adattatore che lega l’ubiquitina e che limita la segnalazione infiammatoria a valle del recettore del TNF, dei recettori Toll-like e delle vie del recettore dell’IL-1. ABIN-1 coopera con la deubiquitinasi A20/TNFAIP3 per modulare la segnalazione mediata da ubiquitina K63 e lineare (M1) su complessi contenenti RIPK1 e NEMO/IKK, plasmando così gli output trascrizionali di NF-κB e MAPK. Attraverso queste interazioni, ABIN-1 influenza l’attivazione dell’immunità innata, la produzione di citochine e le vie di sopravvivenza cellulare, risultando rilevante in modelli di autoimmunità, malattie infiammatorie e patologie tissutali guidate dal sistema immunitario. Inoltre, ABIN-1 è stata collegata alla regolazione delle risposte allo stress cellulare e può influenzare fenotipi proliferativi in contesti in cui la segnalazione di NF-κB è deregolata.

Abin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tnip1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Abin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tnip1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tnip1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Abin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tnip1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Abin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Abin-1 nelle cellule tumorali con espressione di Tnip1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.