ABCG2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416737-LAC

ABCG2 (nota anche come BCRP) è un trasportatore di efflusso umano della famiglia delle cassette leganti l’ATP (ABC) che esporta un’ampia gamma di xenobiotici e metaboliti endogeni attraverso la membrana plasmatica. Contribuisce alle funzioni di barriera e detossificazione in tessuti quali intestino, fegato, placenta e barriera emato-encefalica, e aiuta a regolare l’esposizione intracellulare a piccole molecole tramite un trasporto dipendente dall’ATP. L’attività di ABCG2 interseca le vie della risposta allo stress cellulare e dell’omeostasi metabolica controllando la gestione di metaboliti correlati a porfirine/eme e il flusso di substrati associati al redox. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ABCG2 sono state implicate in fenotipi di trasporto multidrug nella biologia del cancro e in disturbi ereditari e acquisiti della gestione dell’urato e del rischio di gotta, tramite effetti sul trasporto dell’urato.

Le particelle di attivazione lentivirale ABCG2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ABCG2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ABCG2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ABCG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ABCG2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ABCG2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.