20S Proteasome β1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401676-ACT

PSMB1 codifica la subunità catalitica β1 del core del proteasoma umano 20S, che svolge una proteolisi regolata come parte del complesso del proteasoma 26S. Questa attività è fondamentale per il turnover proteico ubiquitina-dipendente, per l’elaborazione degli antigeni destinati alla presentazione su MHC di classe I e per il mantenimento della proteostasi durante lo stress cellulare. La funzione del proteasoma si integra con il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e le vie di segnalazione infiammatoria, modulando l’abbondanza di proteine regolatorie chiave. Un’attività del proteasoma disfunzionale e un’espressione alterata di PSMB1 sono frequentemente studiate nel contesto dei programmi di sopravvivenza delle cellule tumorali, dello stress proteotossico nelle malattie neurodegenerative e dei fenotipi legati al sistema immunitario.

20S Proteasome β1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

20S Proteasome β1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 20S Proteasome β1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 20S Proteasome β1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 20S Proteasome β1 nelle cellule tumorali con espressione di PSMB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.