δ-casein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419849

Panoramica

Csn1s2b codifica la δ-caseina, una proteina secreta del latte espressa nella ghiandola mammaria che contribuisce alla struttura delle micelle di caseina e al legame di calcio/fosfato durante l’allattamento. In quanto parte del cluster genico delle caseine, la sua trascrizione è regolata in modo rigoroso durante la gravidanza e l’allattamento dal segnale prolattina/JAK2–STAT5 e da altre vie sensibili agli ormoni che coordinano la sintesi e la secrezione delle proteine del latte. I cambiamenti nei pattern di espressione delle caseine vengono utilizzati come indicatori della differenziazione dell’epitelio mammario e della competenza lattogenica, e i geni della famiglia delle caseine sono spesso monitorati negli studi sullo sviluppo della ghiandola mammaria e sulle risposte allo stress. Nei modelli murini, l’alterazione dei componenti della caseina può chiarire i meccanismi alla base della composizione del latte, della nutrizione neonatale e dei fenotipi legati alla lattazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO δ-casein (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Csn1s2b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Csn1s2b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Csn1s2b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina δ-casein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Csn1s2b per lo studio della segnalazione di δ-casein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Csn1s2b critici per la funzione di δ-casein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Csn1s2b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal δ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal δ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Csn1s2b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal δ-casein Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR δ-casein (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Csn1s2b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Csn1s2b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.