β-tectorin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423332

Panoramica

Tectb codifica la β-tectorina, una glicoproteina secreta che contribuisce all’architettura della matrice extracellulare della membrana tettoria dell’orecchio interno, dove aiuta a organizzare assemblaggi supramolecolari importanti per la meccanica cocleare. Modellando l’accoppiamento biomeccanico tra la membrana tettoria e le stereociglia delle cellule ciliate, la β-tectorina favorisce un’efficiente trasduzione meccanoelettrica e la segnalazione evocata dal suono. L’alterazione dei componenti della matrice della membrana tettoria, incluse le reti associate alla β-tectorina, è collegata a soglie uditive modificate e a fenotipi di ipoacusia neurosensoriale, rendendo Tectb un locus utile per studiare la regolazione, dipendente dalla matrice, della funzione sensoriale. Nei modelli murini, la perturbazione di Tectb consente di analizzare l’assemblaggio della matrice extracellulare, la secrezione epiteliale e le relazioni struttura–funzione alla base dell’elaborazione uditiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-tectorin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tectb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tectb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tectb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-tectorin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tectb per lo studio della segnalazione di β-tectorin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tectb critici per la funzione di β-tectorin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tectb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal β-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tectb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β-tectorin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR β-tectorin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tectb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tectb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.