β3Gn-T3 Plasmide Double Nickase (m): sc-428303-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β3Gn-T3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m) e il β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira B3gnt3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β3Gn-T3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β3Gn-T3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
B3gnt3 codifica β3Gn-T3, una β-1,3-N-acetilglucosaminiltransferasi che contribuisce all’estensione della poli‑N‑acetillattosammina su glicoproteine e glicolipidi all’interno dell’apparato di Golgi. Modellando la ramificazione e le strutture terminali degli N‑ e O‑glicani, β3Gn‑T3 influenza le interazioni mediate da lectine, l’adesione cellula‑cellula e il traffico dei recettori, con effetti rilevanti per la biologia immunitaria ed epiteliale. Un’alterazione dell’attività delle glicosiltransferasi può rimodellare il glicoma della superficie cellulare, modificando le soglie di segnalazione e i segnali infiammatori pertinenti a modelli di infezione, omeostasi mucosale e cambiamenti di glicosilazione associati ai tumori. Nei sistemi murini, la perturbazione di B3gnt3 viene utilizzata per studiare come l’allungamento dei glicani regoli il riconoscimento dei ligandi e l’attivazione delle vie a valle.
β3Gn-T3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus B3gnt3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di B3gnt3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di B3gnt3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con B3gnt3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.