β-1,4-Gal-T4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407251

Panoramica

B4GALT4 codifica la β-1,4-Gal-T4, una β-1,4-galattosiltransferasi residente nel Golgi che trasferisce galattosio alla N-acetilglucosammina per costruire unità di lattosamina di tipo II su glicani N- e O-legati e su glicolipidi. Attraverso il suo contributo alla glicosilazione, la β-1,4-Gal-T4 influenza il ripiegamento proteico, il traffico intracellulare, il tempo di permanenza dei recettori e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice mediate da proteine leganti i glicani. Alterazioni della galattosilazione e dell’estensione della lattosamina possono rimodellare le reti di segnalazione e il riconoscimento immunitario, collegando il rimodellamento dei glicani dipendente da B4GALT4 a processi rilevanti per la malattia, come l’infiammazione e il comportamento delle cellule tumorali. Come parte della più ampia rete di glicosiltransferasi, B4GALT4 contribuisce a definire la composizione del glicoma di superficie cellulare, con effetti su programmi di adesione, migrazione e differenziamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-1,4-Gal-T4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene B4GALT4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del B4GALT4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto B4GALT4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-1,4-Gal-T4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di B4GALT4 per lo studio della segnalazione di β-1,4-Gal-T4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni B4GALT4 critici per la funzione di β-1,4-Gal-T4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di B4GALT4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β-1,4-Gal-T4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus B4GALT4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β-1,4-Gal-T4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β-1,4-Gal-T4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia B4GALT4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio B4GALT4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.