α1B-AR Plasmide Double Nickase (m): sc-419020-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α1B-AR Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α1B-AR Double Nickase Plasmid (m) e il α1B-AR Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adra1b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α1B-AR Plasmide Double Nickase (m) | sc-419020-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1B-AR Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419020-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adra1b codifica il recettore adrenergico α1B murino (α1B-AR), un recettore accoppiato a proteine G per le catecolamine che si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, aumentando la segnalazione IP3/DAG, la mobilizzazione di Ca2+ intracellulare e l’attività della protein chinasi C. Attraverso queste vie regola il tono della muscolatura liscia vascolare, l’eccitabilità cardiaca e neuronale e la modulazione del rilascio di neurotrasmettitori, integrando gli input simpatici con MAPK/ERK e altre cascate di chinasi. La segnalazione dell’α1B-AR influenza programmi trascrizionali legati alla crescita cellulare e alle risposte allo stress, e un’alterata funzione dei recettori adrenergici è stata associata a fenotipi rilevanti per l’ipertensione, il rimodellamento cardiaco e la regolazione neurocomportamentale. I modelli murini Adra1b supportano quindi studi meccanicistici della segnalazione adrenergica in ambito cardiovascolare e del sistema nervoso.
α1B-AR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adra1b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adra1b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adra1b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adra1b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.