Silenciadores de Genes

Santa Cruz Biotechnology now offers target-specific CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmids, CRISPR Double Nickase Plasmids, CRISPR/ dCas9 Activation Plasmids and CRISPR Lenti Activation Systems for over 18,910 human and 18,340 mouse protein encoding genes.

Historia del RNAi

El ARN de interferencia (ARNi) fue descrito por primera vez en C. elegans, por los Premios Novel Fire y Mello (1), y representa en la actualidad uno de los descubrimientos más prometedores de la biología molecular. La actividad del ARNi endógeno ha sido relacionada con la regulación de la movilidad de los transposones (2), la determinación de perfiles de expresión genética (3), y el destino celular (3), además de ser un componente crucial en la defensa celular innata contra infecciones virales in vivo (5). Se han demostrado tres mecanismos de ARNi únicos, que controlan la expresión de un gen de interés. El ARNi regula la transcripción mediante modificaciones en la formación de heterocromatina (6). El ARNi ejerce dos formas de control post- transcripcional. En primer lugar, puede inhibir la traducción de un ARNm dado (7), y en segundo lugar, puede dirigir la destrucción de un ARNm dado a través del complejo RISC (8). Primero las DICER procesan el dsARN dejando un resto de dos nucleótidos en 3'. Esto permite que el dsARN se una al complejo RISC y conduce la activación de la actividad enzimática de la proteína Argonauta, componente ARNasa del complejo RISC, que destruye una de las cadenas del ARN. La hebra guía restante, mediante unión complementaria, lleva al complejo RISC a asociarse/escindir las moléculas de ARN de interés.

El descubrimiento del ARNi introdujo una herramienta de poder extraordinario para investigadores y se transformo en una herramienta de prometedor potencial terapeutico, conllevando al Premio Nobel de 2006 en Fisiologia o Medicina para Andrew Z. Fire y Craig C. Mello. En el laboratorio, las moleculas de ARNi se usan para reducir la actividad de la expresion genetica de interes en una variedad de organismos y tipos celulares, explotando cada uno de los tres mecanismos de inhibicion de expresion celular mencionados antes. Estas tecnicas son utiles para manipular un sistema experimental para explorar funciones individuales de genes y proteinas, asi como sus relaciones con otros genes y proteinas. El ARNii tambien tiene un interesante potencial clinico (9).

Los detalles de estos mecanismos de ARN interferente son estudiados con rigurosidad, aunque todavía queda mucho por elucidar. Sin embargo el control del ARNi en la degradación del ARNm a través del complejo RISC, ha sido identificado y descrito, así como el mecanismo de los silenciadores de genes ARNi.

Santa Cruz Biotechnology, Inc. ofrece una linea completa de Silenciadores de Genes de ARNi, incluyendo RNAic, plasmidos ARNhc y productos lentivirales de ARNhc cubriendo mas del 99% de los genes codificadores de proteinas en humanos y ratones.

ARNs de interferencia ofrecidos por Santa Cruz Biotechnology Inc.

Silenciadores de Genes siRNA

siRNA description:

  • ARNic se refiere al ARN de interferencia corto
  • Es necesario transfectar las células usando un reactivo de transfección de base lipídica
  • Es útil para un knock-down transitorio

siRNA product details:

  • Los Silenciadores de Genes de ARNic son conjuntos de 3 moleculas de ARN de doble cadena especificas de entre 19 y 25 nucleotidos de largo, con 2 sobrantes en 3' por cada extremo.
  • 10 µM, 50-100 transfecciones
  • para una verificacion independiente de los resultados del silenciamiento de genes, tambien se provee bajo pedido los componented individuales de ARNic

Support Products for siRNA Gene Silencers:

  • Hay disponibles adecuados anticuerpos control
  • Se encuentran disponibles Primers para RT-PCR
  • siRNA Dilution Buffer, sc-29527
  • siRNA Transfection Reagent, sc-29528
  • siRNA Transfection Medium, sc-36868
  • siRNA Reagent System, sc-45064
  • Control siRNAs, including Control siRNA-A, sc-37007
  • Control siRNA (FITC Conjugate)-A, sc-36869
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¿Cómo funcionan los Silenciadores de Genes siRNA ?

Download siRNA Protocols

FGF-19 siRNA (h): sc-39480

CD9 siRNA (h): sc-35032

Daxx siRNA (h): sc-35178

Cdc6 siRNA (h): sc-29258

cytochrome c siRNA (h): sc-29292

cPLA2 siRNA (h): sc-29280

ERK 1 siRNA (m): sc-29308

c-Src siRNA (h): sc-29228

p53 siRNA (h): sc-29435

Lamin A/C siRNA (h): sc-35776

Silenciadores Génicos shRNA (Plásmidos)

shRNA Plasmid description:

  • ARNhc se refiere al ARN horquillado corto
  • Los plásmidos codificados en el shARN entran en la célula mediante transfección de base lipídica
  • Los Plasmidos de ARNhc son capaces de una temporaria o estable inhibicion de la expresion de los genes de interes
  • Los Plasmidos de ARNhc se proveen a manera de un conjunto de cinco vectores plasmidos lentivirales, cada uno de los cuales codifica para un ARNhc especifico de 19 a 25 nucleotidos de largo con un una curva de 6 pares de bases
  • 20 µg, hasta 20 transfecciones
  • La transcripcion de ARNhc se encuentra bajo el control del promotor H1
  • proporcionado como un plásmido purificado de ADN listo para la transfección
  • Luego de la transfeccion, se puede seleccionar las células que expresan el ARNhc de manera estable a través del tratamiento con puromiocina

Support Products for shRNA Plasmid Gene Silencers:

  • Hay disponibles adecuados anticuerpos control
  • Se encuentran disponibles Primers para RT-PCR
  • shRNA Plasmid Transfection Reagent, sc-108061
  • shRNA Plasmid Transfection Medium, sc-108062
  • Control shRNA Plasmid-A, sc-108060
  • Control shRNA Plasmid-B, sc-108065
  • Control shRNA Plasmid-C, sc-108066

Confirm shRNA Plasmid Gene Silencer transfection efficiency with copGFP Control Plasmid: sc-108083

Generar células con expresión estable de shARN

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¿Cómo funcionan los Silenciadores de Genes shARN?

Download shRNA Protocols

IL-1α shRNA Plasmid (h): sc-39613-SH

PTN shRNA Plasmid (m): sc-39714-SH

TCF-4 shRNA Plasmid (h): sc-43525-SH

MIS shRNA Plasmid (h): sc-39793-SH

VEGF-D shRNA Plasmid (h): sc-39844-SH

Amylase shRNA Plasmid (h): sc-29675-SH

FGF-19 shRNA Plasmid (h): sc-39480-SH

MMP-9 shRNA Plasmid (h): sc-29400-SH

BMP-4 shRNA Plasmid (h): sc-39744-SH

Cyr61 shRNA Plasmid (h): sc-39331-SH

shRNA partículas antivirales

shRNA Lentiviral Particle description:

  • ARNhc se refiere al ARN horquillado corto
  • Las Partículas Lentivirales proporcionan un plásmido de shARN a las células diana
  • Utiles parala silenciacion temporaria o estable de un gen de interes
  • Las Partículas Lentivirales se proporcionan como virus listos para la transducción y silenciación de genes diana de células mamíferas (humanas o de ratón)
  • 200 µl de virus que contiene 106 particulas lentivirales infecciosas de transduccion por mL, suficiente para 10-20 transducciones
  • Las Particulas Lentivirales generalmente contienen de 3 a 5 componentes de expression, cada uno de los cuales codifica un objetivo especifico de 19-25 nucleotidos con una curva de 6 pares de bases
  • Luego de la transduccion, se puede seleccionar las células que expresan el ARNhc de manera estable a través del tratamiento con puromiocina
  • Las Partículas Lentivirales de Control copGFP permiten confirmar la eficiencia de transducción de las Partículas Lentivirales en la población de células diana mediante la expresión de GFP, detectable mediante citometría de flujo o microscopía de fluorescencia.
  • Los beneficios de usar Particulas Lentivirales de ARNhc incluyen el evitar tecnicas problematicas de transfeccion y la habilidad de introducir ARNhc a cualquier tipo celular.
  • Informacion de Bioseguridad- Las Particulas Lentivirales son incapaces de replicarse y se diseñan para auto-inactivarse luego de la transduccion e integracion de los componentes de ARNhc dentro del ADN genomico de la celula de interes.

Support Products for shRNA Lentiviral Particle Gene Silencers:

  • Hay disponibles adecuados anticuerpos control
  • Se encuentran disponibles Primers para RT-PCR
  • Control shRNA Lentiviral Particles: sc-108080
  • copGFP Control Lentiviral Particles: sc-108084
  • Puromycin dihydrochloride: sc-108071

Generar células con expresión estable de shARN

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¿Cómo funcionan los Silenciadores de Genes de Partículas Lentivirales?

Download Lentiviral Protocols

Use un Control de Transducción eficiente

Particulas Lentivirales de Control copGFP

293T cells stably transduced with copGFP Control Lentiviral Particles (sc-108084) compared with non-transduced 293T cells as a negative control.


PNP shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-45991-V

ephrin-A1 shRNA (m) Lentiviral Particles: sc-39427-V

MCP-4 shRNA Plasmid (h): sc-72122-SH

TNFβ shRNA Plasmid (h): sc-37218-SH

Somatostatin shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-39728-V

Fos B shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-35403-V

Preguntas Frecuentes

  • ¿Qué ventajas tiene usar shARN en vez de siARN?

    La transfeccion de los Silenciadores de Genes de ARNic dentro de celulas cultivadas provee una eficiente y rapida reduccion de la expesion del gen de interes, aunque de poca duracion. Se puede alcanzar la silenciacion estable usando plasmidos de ARNhc o Particulas Lentivirales de ARNhc, seguido por la seleccion con puromiocina. De modo que, cuando se intenta modificar la expresion de una proteina con renovacion lenta, los plasmidos de ARNhc o las Particulas Lentivirales de ARNhc serian ideales para tal objetivo.

  • ¿Qué diferencias hay entre Partículas Lentivirales de shARN y Plásmidos shARN?

    Para el uso de Plásmidos de shARN es necesaria la transfección. Mientras que las Partículas Lentivirales de shARN están listas para usar prácticamente en cualquier tipo celular, incluyendo cultivos primarios y células que no se dividen. Tanto los Plásmidos de shARN como las Partículas Lentivirales pueden utilizarse para expresar de forma estable el shARN tras tratamiento con puromicina. Las Partículas Lentivirales se envían en hielo seco, mientras que los plásmidos se envían en hielo Azul.

  • ¿Poseen los productos Lentivirales de shARN alguna limitación de seguridad?

    Las partículas lentivirales se pueden emplear en las instalaciones de cultivo celular con Nivel de Bioseguridad 2 (deben tratarse con el mismo nivel de precaución que cualquier otro agente infeccioso). Las Partículas Lentivirales son incapaces de replicarse y están diseñadas para auto-inactivarse tras la transducción e integración de los componentes del shARN dentro del ADN de las células de interés.

  • ¿Las secuencias de los shARN son las mismas que las de los siARN del mismo gen? ¿Las secuencias se encuentran disponibles?

    Si. Las secuencias de nuestros Plasmidos de ARNhc son las mismas que las de los silenciadores de genes de ARNic dirigidas al mismo gen. Dichas secuencias se encuentran disponibles para nuestros clientes. Pongase en contacto con su representante tecnico.

  • Los Plasmidos de ARNhc se proveen a manera de un conjunto de 3 a 5 plasmidos. Se proveen en envases separados? Se venden por separado los plasmidos individuales de ARNhc?

    Los plasmidos de ARNhc se envian en un envase. Ofrecemos las cadenas de ARNic por separado bajo pedido. Quizas ofrescamos los plasmidos por separado en el futuro.

  • ¿Qué tipo de vectores lentivirales utilizan? ¿Cuál es el "nombre del vector"?

    El vector lentiviral que usamos ha sido fabricado por nosotros, y se encuentra patentado. Por favor indíquenos que información necesita y por qué. Quizás podamos responder a sus preguntas sin revelar información confidencial.

  • ¿Qué tipo de promotor de transcripción utiliza su vector shARN?

    El vector usa un promotor H1

  • ¿Que clase de marcador(es) de selección hay en el vector?

    El vector contiene un gen de resistencia a la Puromicina que codifica la enzima N-acetiltransferasa para seleccionar las células cuya trasfección ha sido satisfactoria.

  • ¿Cómo se prolifera el plásmido del vector lentiviral?

    Las Particulas Lentivirales y los Plasmidos de ARNhc se venden como productos listos para la transfeccion/ transduccion. No es necesaria ninguna preparacion adicional. Los Silenciadores de Genes de ARNhc son productos de consumo para los cuales no se proveen los protocolos de propagacion.

  • ¿Qué es el copGFP y cómo es útil para su uso con Plásmidos shARN y Partículas Lentivirales?

    Mediante la administracion de plasmidos o particulas lentivirales con copGFP a un conjunto separado de las celulas de interes, se puede identificar la transfeccion o la eficiencia de la transduccion viral para la poblacion celular de interes. Los plasmidos o particulas lentivirales con copGFP conllevan a la expresion de la proteina fluorescente verde copepod, la cual se puede detectar usando un microscopio de fluorescencia o citometria de flujo.

  • ¿Cuál es la diferencia entre los productos shARN (h) y (h2)- (por ejemplo E-Cadherin, sc-35242-SH and sc-44222-SH)?

    Los productos (h) y (h2) están diseñados para silenciar el mismo gen, pero tienen secuencias distintas.

  • ¿Que productos complementarios y reactivos de transfección debo comprar a SCBT para utilizar sus plásmidos de shARN?

    Recomendamos nuestro Agente de Transfeccion de ADN plasmido de ARNhc, sc-108061, ademas del substrato de Transfeccion de DNA plasmido de ARNhc, sc-108062. Tambien recomendamos nuestro Plasmido de ARNhc de ADN, cualquiera de los siguientes: 108060 (A), sc-108065 (B) o sc-108066 ©. Estos codifican secuencias de ARN que no seran dirigidas a ningun ARNm mamifero conocido.

References

  1. Fire, A., Xu, S.Q., Montgomery, M.K., Kostas, S.K., Driver, S.E. and Mello, C.C. 1998. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391: 806-811.

  2. Das, P.P., Bagijn M.P., Goldstein, L.D., Woolford, J.R., Lehrbach, N.J., Sapetschnig, A., Buhecha, H.R., Gilchrist, M.J., Howe, K.L., Stark, R., Matthews, N., Berezikov, E., Ketting, R.F., Tavaré, S. and Miska E.A. 2008. Piwi and piRNAs Act Upstream of an Endogenous siRNA Pathway to Suppress Tc3 Transposon Mobility in the Caenorhabditis elegans Germline. Mol Cell 31: 79-90.

  3. Kawasaki, H., Taira, K. and Morris, K.V. 2005. siRNA Induced Transcriptional Gene Silencing in Mammalian Cells. Cell Cycle 4: 442-448.

  4. Georgantas III, R.W., Hildreth, R., Morisot, S., Alder, J., Liu, C.G., Heimfeld, S., Calin, G.A., Croce, C.M. and Civin, C.I. 2007. CD34+ hematopoietic stem-progenitor cell microRNA expression and function: A circuit diagram of differentiation control. PNAS 104: 2750-2755.

  5. Chotkowskia, H.L., Ciotab, A.T., Jiab, Y., Puig-Basagoitic, F., Kramerb, L.D., Shic, P.Y. and Glaser, R.L. 2008. West Nile virus infection of Drosophila melanogaster induces a protective RNAi response. Virology 377: 197-206.

  6. Kawasaki, H., Taira, K. and Morris, K.V. 2005. siRNA Induced Transcriptional Gene Silencing in Mammalian Cells. Cell Cycle 4: 442-448.

  7. Tamura, Y., Yoshida, M., Ohnishi, Y. and Hohjoh, H. 2008. Variation of gene silencing involving endogenous microRNA in mammalian cells. Mol Biol Rep, epub.

  8. Hammond,S.M., Boettcher, S., Caudy, A.A., Kobayashi, R. and Hannon, G.J. 2001. Argonaute2, a Link Between Genetic and Biochemical Analyses of RNAi. Science 293: 1146-1150.

  9. Zhanga, Y., Yanga, H., Xiaoa, B., Wub, M., Zhoua, W., Lia, J., Lib, G. and Christados, P. 2008. Dendritic cells transduced with lentiviral-mediated RelB-specific ShRNAs inhibit the development of experimental autoimmune myasthenia gravis. Mol Imunol, epub.

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