ZnT-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405830

Panoramica

SLC30A7 codifica per il trasportatore di zinco ZnT-7, un membro della famiglia SLC30 (ZnT) che media l’efflusso di zinco dal citosol verso compartimenti intracellulari, sostenendo l’omeostasi dello zinco e la disponibilità compartimentalizzata degli ioni metallici. Regolando la distribuzione dello zinco all’interno della via secretoria e del sistema endomembranoso, ZnT-7 influenza l’attività delle metalloproteine, l’equilibrio redox e i processi di segnalazione zinco-dipendenti che modellano il metabolismo cellulare e le risposte allo stress. Alterazioni del trasporto dello zinco sono state associate a perturbazioni della biologia dei granuli di insulina, della segnalazione infiammatoria e dello stress ossidativo, rendendo SLC30A7 di interesse negli studi sulla disfunzione metabolica e sui meccanismi complessi di malattia correlati. In quanto regolatore dell’omeostasi dello zinco, ZnT-7 è rilevante anche per ricerche sulla funzione degli organelli e sulla maturazione di enzimi metallo-dipendenti nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC30A7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC30A7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC30A7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZnT-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC30A7 per lo studio della segnalazione di ZnT-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC30A7 critici per la funzione di ZnT-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC30A7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZnT-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZnT-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC30A7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZnT-7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZnT-7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC30A7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC30A7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.