ZnT-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403451

Panoramica

SLC30A10 codifica ZnT-10, un membro della famiglia SLC30 di trasportatori di metalli che regola l’omeostasi intracellulare dei cationi bivalenti, con un ruolo chiave nell’efflusso e nella compartimentalizzazione del manganese. Controllando i livelli cellulari di manganese, ZnT-10 influenza la funzione delle metalloproteine, le risposte allo stress ossidativo e i processi di segnalazione a valle sensibili all’attività enzimatica dipendente dai metalli. La disregolazione di SLC30A10 è associata ad accumulo anomalo di manganese e ad alterazioni nella gestione dei metalli che possono compromettere la fisiologia epatica e neurologica. Di conseguenza, ZnT-10 viene studiato in vie che collegano il trasporto dei metalli, la funzione mitocondriale e l’adattamento cellulare allo stress in modelli cellulari umani pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC30A10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC30A10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC30A10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZnT-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC30A10 per lo studio della segnalazione di ZnT-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC30A10 critici per la funzione di ZnT-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC30A10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZnT-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZnT-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC30A10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZnT-10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZnT-10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC30A10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC30A10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.