ZnT-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403451-ACT

SLC30A10 codifica o transportador humano de zinco ZnT-10, um membro da família SLC30 que medeia a homeostase celular de manganês e zinco ao regular o efluxo e a compartimentalização de metais divalentes. Ao controlar a distribuição intracelular de metais, o ZnT-10 influencia respostas ao stress oxidativo, a função mitocondrial e a atividade de enzimas dependentes de metais, ligando o transporte de oligoelementos a vias metabólicas e redox mais amplas. A desregulação da função de SLC30A10 está associada a alterações no manuseamento do manganês e a fenótipos neuro-hepáticos a jusante, tornando-o um alvo relevante para estudar toxicidade por metais, vulnerabilidade neuronal e fisiologia hepática. Como transportador de membrana, o ZnT-10 também oferece uma leitura experimental acessível para investigar o tráfego do transportador, a localização subcelular e a regulação génica responsiva a metais.

ZnT-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC30A10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZnT-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC30A10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC30A10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZnT-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC30A10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZnT-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZnT-10 em células tumorais com expressão de SLC30A10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.