ZnT-10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403451-ACT

SLC30A10 codifica il trasportatore umano di zinco ZnT-10, un membro della famiglia SLC30 che contribuisce all’omeostasi cellulare di manganese e zinco regolando l’efflusso e la compartimentalizzazione dei metalli bivalenti. Controllando la distribuzione intracellulare dei metalli, ZnT-10 influenza le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e l’attività di enzimi metallo-dipendenti, collegando il trasporto di oligoelementi a vie metaboliche e redox più ampie. Una funzione alterata di SLC30A10 è associata a una gestione anomala del manganese e a fenotipi neuro-epatici a valle, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della tossicità dei metalli, della vulnerabilità neuronale e della fisiologia epatica. In quanto trasportatore di membrana, ZnT-10 offre inoltre un readout accessibile per indagare il traffico del trasportatore, la localizzazione subcellulare e la regolazione genica sensibile ai metalli.

ZnT-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC30A10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZnT-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC30A10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC30A10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZnT-10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC30A10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZnT-10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZnT-10 nelle cellule tumorali con espressione di SLC30A10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.