ZNF831 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414334-ACT

ZNF831 (proteina a dita di zinco 831) è un fattore di trascrizione umano di tipo C2H2 con dita di zinco, implicato nella regolazione di programmi di espressione genica che modellano la funzione e la differenziazione delle cellule immunitarie. Partecipa al controllo trascrizionale e a processi associati alla cromatina che influenzano la segnalazione delle citochine e l’attivazione dei linfociti, integrandosi con vie più ampie che governano le risposte immunitarie adattative. Studi genetici hanno collegato variazioni in prossimità di ZNF831 a tratti immuno-mediati e alla suscettibilità a malattie autoimmuni, a supporto della sua rilevanza per l’analisi delle reti regolatorie alla base dei fenotipi infiammatori. In quanto proteina nucleare legante il DNA, ZNF831 rappresenta un utile punto d’accesso per esplorare i circuiti trascrizionali e l’architettura della regolazione genica in sistemi modello ematopoietici e immunitari.

ZNF831 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF831 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF831 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF831 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF831, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF831. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF831 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF831 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF831 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF831 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.