ZNF71 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410081-LAC

ZNF71 codifica una proteina a dita di zinco con dominio KRAB che funge da regolatore trascrizionale specifico di sequenza, in genere agendo in collaborazione con il macchinario di rimodellamento della cromatina associato a KAP1/TRIM28 per modellare eterocromatina repressiva e modulare finemente i programmi di espressione genica. Come parte della più ampia rete delle dita di zinco C2H2, ZNF71 è collegato al controllo degli stati di differenziazione cellulare, al silenziamento epigenetico degli elementi ripetitivi e al mantenimento dell’omeostasi trascrizionale. La disregolazione dei fattori KRAB-ZNF è spesso studiata nel contesto dei paesaggi trascrizionali alterati osservati nel cancro e in altri disturbi con instabilità epigenetica, rendendo ZNF71 un nodo rilevante per indagare i circuiti dei fattori di trascrizione. La ricerca su ZNF71 interseca comunemente vie che regolano l’accessibilità della cromatina, la regolazione di promotori/enhancer e la repressione o attivazione genica dipendente dal contesto.

Le particelle di attivazione lentivirale ZNF71 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ZNF71 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ZNF71 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF71, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ZNF71. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ZNF71 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.