ZIP4 Plasmide Double Nickase (m): sc-428200-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZIP4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZIP4 Double Nickase Plasmid (m) e il ZIP4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc39a4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZIP4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428200-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Slc39a4 codifica ZIP4, un importatore di zinco della membrana plasmatica che regola l’assorbimento di zinco a livello cellulare e, di conseguenza, sostiene l’attività degli enzimi zinco-dipendenti, la funzione dei fattori di trascrizione e l’omeostasi redox. ZIP4 contribuisce all’assorbimento dei nutrienti e ai programmi di differenziamento dell’epitelio, collegando la disponibilità di zinco alla segnalazione proliferativa e alle vie di risposta allo stress. Un’attività di ZIP4 deregolata altera l’omeostasi dello zinco e può modificare la funzione di barriera e la segnalazione infiammatoria, rendendo Slc39a4 un nodo utile per studiare il trasporto degli ioni metallici nella biologia metabolica ed epiteliale. Poiché lo zinco è un cofattore critico per molte proteine che legano il DNA e per enzimi di riparo, il flusso di zinco dipendente da ZIP4 può influenzare anche i processi di mantenimento del genoma rilevanti per i fenotipi di malattia nei sistemi modello.
ZIP4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc39a4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc39a4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc39a4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc39a4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.