Zic4 Plasmide Double Nickase (h): sc-407517-NIC

ZIC4 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco Zic4, un regolatore nucleare che si lega al DNA per controllare programmi di espressione genica durante il patterning embrionale e il neurosviluppo. Zic4 partecipa a reti trascrizionali che coordinano la differenziazione neuronale, l’identità regionale nel cervello in sviluppo e la morfogenesi del cervelletto, intersecandosi con vie di segnalazione dello sviluppo come WNT e SHH, che modellano le strutture della linea mediana dorsale e del rombencefalo. Alterazioni del dosaggio di ZIC4 o l’interruzione della sua funzione regolatoria sono state associate a malformazioni congenite del cervello e a fenotipi del neurosviluppo, rendendolo un locus utile per studiare il controllo trascrizionale nelle linee cellulari neurali. Nei modelli cellulari, la perturbazione di ZIC4 aiuta a definire le reti di regolazione genica che governano le decisioni di destino dei progenitori, la maturazione neuronale e stati della cromatina specifici di linea.

Zic4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZIC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZIC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZIC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZIC4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.