ZHX2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-436490-ACT

Das Mausgen *Zhx2* kodiert den Transkriptionsfaktor Zinc Fingers and Homeoboxes 2 (ZHX2), einen überwiegend nukleären Regulator, der Genexpressionsprogramme moduliert, welche die zelluläre Differenzierung, Proliferation und metabolische Homöostase steuern. ZHX2 wirkt innerhalb von Netzwerken der Transkriptionsrepression/-aktivierung über DNA-bindende Zinkfinger- und Homeobox-Domänen und prägt dadurch gewebespezifische Transkriptionszustände. In murinen Systemen wurde eine veränderte Zhx2-Aktivität mit einer dysregulierten hepatischen Genexpression, Entwicklungsphänotypen sowie kontextabhängigen Effekten auf onkogene Signalwege und tumorsuppressive Programme in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ZHX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Linienidentität und krankheitsassoziierter genregulatorischer Schaltkreise zu untersuchen.

ZHX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zhx2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZHX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zhx2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zhx2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZHX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zhx2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZHX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZHX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zhx2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.