ZEB Plasmide Double Nickase (h): sc-400201-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZEB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZEB1 Double Nickase Plasmid (h) e il ZEB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZEB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZEB1 Antibody (416A7H10): sc-81428
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZEB Plasmide Double Nickase (h) | sc-400201-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZEB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400201-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZEB1 codifica la proteina homeobox ZEB che si lega a motivi E-box tramite dita di zinco, un regolatore trascrizionale che si associa a sequenze simili all’E-box per modulare programmi di espressione genica che controllano la transizione epitelio-mesenchimale, la polarità cellulare e la differenziazione. Attraverso interazioni con co-repressori come CtBP e con fattori di rimodellamento della cromatina, ZEB influenza vie tra cui la segnalazione TGF-β/SMAD e reti trascrizionali che governano l’adesione e il rimodellamento del citoscheletro. Un’attività deregolata di ZEB1 è stata collegata ad alterazioni della programmazione dello sviluppo e della plasticità epiteliale, ed è frequentemente studiata in contesti di invasione delle cellule tumorali, fenotipi associati alla metastasi e meccanismi di resistenza alle terapie. Inoltre, il controllo trascrizionale dipendente da ZEB1 contribuisce a stati di tipo staminale e a cambiamenti nell’espressione di geni legati all’immunità in molteplici modelli di malattia.
ZEB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZEB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZEB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZEB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZEB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.