Wnt-7b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423722

Panoramica

Wnt7b codifica la glicoproteina secreta Wnt-7b, un ligando che attiva la segnalazione Wnt canonica e non canonica per regolare le decisioni di destino cellulare, la proliferazione, la polarità e la definizione dei pattern tissutali durante l’embriogenesi e l’omeostasi postnatale nel topo. Il legame di Wnt-7b ai recettori Frizzled/LRP influenza la trascrizione dipendente da β-catenina, oltre ai percorsi di polarità planare delle cellule e a quelli collegati al Ca²⁺, plasmando le interazioni epitelio–mesenchimali e la morfogenesi degli organi. Un’attività di Wnt7b deregolata è stata associata a programmi di sviluppo aberranti e a processi di rimodellamento che intersecano la segnalazione oncogenica, la fibrosi e microambienti infiammatori in molteplici contesti tissutali. In quanto nodo della via, Wnt-7b è spesso studiato per i suoi ruoli nel comportamento di cellule staminali/progenitrici, nella biologia vascolare e delle vie aeree e nel crosstalk con le vie di segnalazione TGF-β, Hedgehog e Notch.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-7b (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt7b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt7b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt7b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-7b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt7b per lo studio della segnalazione di Wnt-7b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt7b critici per la funzione di Wnt-7b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt7b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-7b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-7b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt7b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-7b Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-7b (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt7b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt7b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.