Wnt-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423717

Panoramica

Wnt4 codifica il ligando di segnalazione secreto Wnt-4, un regolatore chiave dell’attività della via WNT che modella lo sviluppo embrionale e l’omeostasi dei tessuti adulti. Nel topo, Wnt-4 influenza le decisioni sul destino cellulare, la polarità, la migrazione e la differenziazione attraverso un’attivazione dipendente dal contesto della segnalazione canonica mediata da β-catenina e delle vie WNT non canoniche. È fortemente associato alla morfogenesi dell’apparato riproduttivo e del rene, a programmi osteogenici e stromali e alla modulazione del microambiente immunitario tramite reti a valle di rimodellamento trascrizionale e del citoscheletro. Una segnalazione di Wnt-4 deregolata è stata associata a fenotipi dello sviluppo e a processi rilevanti per la malattia, come fibrosi, differenziazione aberrante e rimodulazione delle vie di segnalazione associata ai tumori, utilizzata come readout meccanicistico nei modelli di ricerca biomedica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt4 per lo studio della segnalazione di Wnt-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt4 critici per la funzione di Wnt-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.