VpreB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423683

Panoramica

Vpreb1 codifica VpreB1, una componente della catena leggera surrogata che si associa a λ5 (IGLL1) e alla catena pesante μ delle immunoglobuline per formare il recettore delle cellule pre-B (pre-BCR) durante le prime fasi della linfopoiesi B nel topo. La segnalazione del pre-BCR coordina l’avanzamento dei checkpoint dalla fase pro-B a quella pre-B promuovendo la proliferazione, imponendo l’esclusione allelica della catena pesante e avviando la ricombinazione della catena leggera tramite vie che interagiscono con le chinasi della famiglia SRC, la segnalazione SYK/BTK e i programmi a valle PI3K–AKT e MAPK. L’alterazione di questo asse perturba le dinamiche dello sviluppo delle cellule B, modifica la formazione del repertorio e può influenzare la competenza immunitaria e i meccanismi di tolleranza. Poiché la funzione del pre-BCR è strettamente legata al controllo dei checkpoint di sviluppo, Vpreb1 viene comunemente studiato in modelli di maturazione anomala delle cellule B e di disregolazione immunitaria rilevanti per la ricerca ematologica e autoimmune.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VpreB1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vpreb1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vpreb1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vpreb1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VpreB1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vpreb1 per lo studio della segnalazione di VpreB1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vpreb1 critici per la funzione di VpreB1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vpreb1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VpreB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VpreB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vpreb1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VpreB1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VpreB1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vpreb1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vpreb1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.