VAX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423657

Panoramica

Vax1 codifica VAX1, un fattore di trascrizione homeobox necessario per il patterning embrionale del prosencefalo e dell’occhio, con ruoli di rilievo nello sviluppo del telencefalo ventrale e del peduncolo ottico. VAX1 regola programmi di espressione genica che coordinano la specificazione dei progenitori neurali, la guida assonale e la formazione della linea mediana, integrandosi con vie di segnalazione dello sviluppo come la ventralizzazione mediata da SHH e altre reti di geni homeobox. Studi genetici nel topo collegano la disfunzione di Vax1 a fenotipi craniofacciali e oculari congeniti, inclusi microftalmia/anoftalmia e anomalie della regione ipotalamo–ipofisaria. Queste caratteristiche rendono VAX1 un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale delle traiettorie neuro-sviluppative e delle decisioni di destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vax1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vax1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vax1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vax1 per lo studio della segnalazione di VAX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vax1 critici per la funzione di VAX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vax1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VAX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VAX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vax1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VAX1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VAX1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vax1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vax1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.