Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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VASP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423654
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VASP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico VASP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VASP Antibody (A-11): sc-46668
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VASP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423654 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Vasp codifica la vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP), una proteina regolatrice dell’actina della famiglia Ena/VASP che coordina l’allungamento dei filamenti di actina, la dinamica delle adesioni focali e le protrusioni di membrana durante la migrazione cellulare. VASP integra i segnali a valle delle protein chinasi dipendenti da cAMP/cGMP e delle GTPasi della famiglia Rho, accoppiando lo stato di fosforilazione al rimodellamento del citoscheletro e alla meccanotrasduzione. Nelle cellule murine, VASP contribuisce alle funzioni piastriniche ed endoteliali, alla crescita dei neuriti e alla motilità delle cellule immunitarie attraverso la regolazione dell’adesione, delle proprietà di barriera e del movimento direzionale. Una dinamica dell’actina dipendente da VASP deregolata è stata implicata in modelli di disfunzione vascolare, in fenotipi correlati alla trombosi e in un comportamento invasivo alterato rilevante per l’infiammazione e la biologia del cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VASP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vasp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vasp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vasp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VASP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vasp per lo studio della segnalazione di VASP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Vasp critici per la funzione di VASP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vasp per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal VASP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VASP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vasp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal VASP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VASP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vasp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vasp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.