vanin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406512
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- vanin-1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico vanin-1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: vanin-1 Antibody (3-RE8): sc-135599
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
vanin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406512 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
VNN1 codifica vanin-1, un ectoenzima ancorato tramite GPI con attività panteteinasi che idrolizza la panteteina generando cisteammina e pantotenato, collegando il metabolismo del coenzima A al controllo redox. Attraverso la modulazione dell’equilibrio cisteammina/cistamina e gli effetti a valle sull’omeostasi del glutatione, vanin-1 influenza le risposte cellulari allo stress ossidativo, all’infiammazione e al danno tissutale. L’espressione di VNN1 è rilevante in contesti epiteliali e immunologicamente pertinenti, dove può contribuire al reclutamento dei leucociti e alla segnalazione infiammatoria associata alle barriere. Un’attività VNN1/vanin-1 disregolata è stata associata a stati patologici infiammatori e metabolici, rendendola un nodo utile per lo studio delle vie di risposta allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VNN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VNN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VNN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina vanin-1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VNN1 per lo studio della segnalazione di vanin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni VNN1 critici per la funzione di vanin-1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VNN1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal vanin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal vanin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VNN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal vanin-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR vanin-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VNN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VNN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.