UNCX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423613

Panoramica

Uncx codifica il fattore di trascrizione homeobox UNCX, un regolatore nucleare legante il DNA implicato nel patterning embrionale e nella specificazione del destino cellulare nel topo. L’attività di UNCX contribuisce a reti regolatorie geniche dello sviluppo che coordinano la differenziazione neuronale e l’organizzazione dei tessuti derivati dai somiti, interfacciandosi con programmi trascrizionali che controllano l’identità regionale e la maturazione. Un’alterazione della funzione di Uncx è stata associata a difetti dello sviluppo assiale/somitico e a processi di neurosviluppo, rendendolo un nodo utile per lo studio di fenotipi congeniti e dell’impegno di linea. Nei sistemi sperimentali, UNCX funge da marcatore e modulatore degli stati di differenziamento in cui è richiesto un controllo trascrizionale preciso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UNCX (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Uncx in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Uncx insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Uncx a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UNCX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Uncx per lo studio della segnalazione di UNCX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Uncx critici per la funzione di UNCX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Uncx per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UNCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UNCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Uncx. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UNCX Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UNCX (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Uncx per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Uncx definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.