UNC5H1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405369

Panoramica

UNC5A codifica il recettore della netrina UNC5H1, una molecola di guida transmembrana che orienta la navigazione assonale e il posizionamento neuronale tramite una segnalazione dipendente dal ligando. UNC5H1 partecipa all’integrazione dei segnali attrattivi/repulsivi mediati da netrina-1 e può influenzare la dinamica del citoscheletro, l’adesione e il comportamento migratorio attraverso vie a valle collegate alle GTPasi della famiglia Rho e alla MAPK. Oltre al neurosviluppo, la segnalazione associata a UNC5H1 è stata collegata alla regolazione dell’apoptosi e a programmi cellulari di tipo epitelio-mesenchimale, sostenendo ruoli nella patterning tissutale e nell’omeostasi. Un’espressione deregolata di UNC5A/UNC5H1 o un’alterata interazione con le vie di segnalazione è stata riportata in studi su disturbi del neurosviluppo e sulla biologia del cancro, dove viene utilizzata come nodo meccanicistico per indagare il dialogo tra segnali di guida e sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UNC5H1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UNC5A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UNC5A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UNC5A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UNC5H1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UNC5A per lo studio della segnalazione di UNC5H1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UNC5A critici per la funzione di UNC5H1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UNC5A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UNC5H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UNC5H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UNC5A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UNC5H1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UNC5H1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UNC5A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UNC5A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.