Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UKHC Plasmide Double Nickase (h): sc-402349-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UKHC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UKHC Double Nickase Plasmid (h) e il UKHC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KIF5B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UKHC Antibody (F-5): sc-133184
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UKHC Plasmide Double Nickase (h) | sc-402349-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UKHC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402349-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KIF5B codifica la catena pesante della chinesina-1 espressa ubiquitariamente (UKHC), un motore dipendente dai microtubuli che alimenta, tramite ATP, il trasporto anterogrado di carichi membranosi, organelli e complessi proteici lungo gli assoni e in altri tipi cellulari polarizzati. Attraverso interazioni con le catene leggere della chinesina e con adattatori del carico, KIF5B coordina il traffico intracellulare, contribuisce alla dinamica del fuso mitotico e sostiene il mantenimento della polarità cellulare e dell’organizzazione del citoscheletro. Queste funzioni si intersecano con vie che regolano il trasporto neuronale, la distribuzione dei mitocondri e il traffico vescicolare nei sistemi secretorio ed endocitico. Alterazioni della regolazione di KIF5B o suoi riarrangiamenti sono stati associati a contesti di segnalazione oncogenica e a fenotipi di traffico compromesso rilevanti per la biologia tumorale e la neurobiologia.
UKHC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KIF5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KIF5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KIF5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KIF5B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.