UGT2B4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404208

Panoramica

UGT2B4 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasi umana che catalizza la glucuronidazione di steroidi endogeni e di metaboliti correlati agli acidi biliari, oltre che di diversi xenobiotici, aumentandone la solubilità per facilitarne l’eliminazione. Questa attività di coniugazione di fase II si integra con le reti di detossificazione epatica e intestinale e interagisce con vie regolate da recettori nucleari che coordinano l’omeostasi metabolica e le risposte allo stress chimico. Variazioni nell’espressione o nell’attività di UGT2B4 possono modificare la gestione di steroidi e acidi biliari e alterare la clearance di substrati a piccola molecola, con effetti sulle relazioni esposizione‑risposta in farmacologia. Di conseguenza, UGT2B4 viene studiato nel contesto di fenotipi associati al metabolismo e di differenze tessuto-specifiche nella capacità di biotrasformazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UGT2B4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UGT2B4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UGT2B4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UGT2B4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UGT2B4 per lo studio della segnalazione di UGT2B4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UGT2B4 critici per la funzione di UGT2B4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UGT2B4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UGT2B4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UGT2B4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UGT2B4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UGT2B4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UGT2B4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UGT2B4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UGT2B4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.