UGT2B15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405610

Panoramica

UGT2B15 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasi umana che catalizza la glucuronidazione di fase II di ormoni endogeni e di numerosi xenobiotici, aumentandone la solubilità per facilitarne l’eliminazione. In quanto enzima della famiglia UGT2 localizzato nella membrana del reticolo endoplasmatico, contribuisce alla clearance metabolica epatica ed extraepatica e modula l’esposizione intracellulare a steroidi bioattivi tramite inattivazione dipendente dalla coniugazione. Le variazioni dell’attività di UGT2B15 possono alterare l’omeostasi degli androgeni e di altri steroidi, influenzando le reti di segnalazione endocrina e i programmi trascrizionali a valle. L’espressione alterata o i polimorfismi sono stati studiati nel contesto dei tumori ormono‑dipendenti e delle differenze interindividuali nel metabolismo dei farmaci e nei fenotipi di tossicità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B15 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UGT2B15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UGT2B15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UGT2B15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UGT2B15.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UGT2B15 per lo studio della segnalazione di UGT2B15, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UGT2B15 critici per la funzione di UGT2B15
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UGT2B15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UGT2B15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UGT2B15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UGT2B15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UGT2B15 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UGT2B15 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UGT2B15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UGT2B15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.