UGT1A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423602

Panoramica

Il gene murino Ugt1a2 codifica l’UDP-glucuronosiltransferasi 1A2 (UGT1A2), un enzima microsomiale di fase II della coniugazione che catalizza la glucuronidazione di numerosi metaboliti endogeni e xenobiotici. Trasferendo acido glucuronico a substrati lipofili, UGT1A2 ne aumenta la solubilità e ne favorisce l’eliminazione attraverso vie di detossificazione epatiche ed extraepatiche. L’attività di Ugt1a2 contribuisce alla più ampia rete dipendente da UGT1A che modula il destino delle sostanze chimiche, le risposte allo stress ossidativo e le interazioni con il metabolismo guidato dai citocromi P450. La perturbazione genetica o sperimentale della coniugazione mediata da UGT è rilevante per studi su farmacocinetica alterata, suscettibilità al danno chimico e fenotipi legati al metabolismo nei modelli murini di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT1A2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ugt1a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ugt1a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ugt1a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UGT1A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ugt1a2 per lo studio della segnalazione di UGT1A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ugt1a2 critici per la funzione di UGT1A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ugt1a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UGT1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UGT1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ugt1a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UGT1A2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UGT1A2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ugt1a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ugt1a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.