Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
UBE2F Plasmide Double Nickase (m): sc-426826-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UBE2F Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UBE2F Double Nickase Plasmid (m) e il UBE2F Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ube2f. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UBE2F Antibody (C-11): sc-398668
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UBE2F Plasmide Double Nickase (m) | sc-426826-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBE2F Plasmide Double Nickase (m2) | sc-426826-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ube2f codifica UBE2F, un enzima coniugante E2 che supporta la neddilazione trasferendo NEDD8 alle ligasi cullin-RING, con un forte legame con l’asse CUL5–RBX2. Attraverso questa via, UBE2F contribuisce a una modifica di tipo ubiquitina che modula il riconoscimento e il turnover dei substrati, plasmando la proteostasi, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione adattativa allo stress. La perturbazione della neddilazione dipendente da UBE2F può alterare l’attività delle CRL e i conseguenti programmi trascrizionali e apoptotici, rendendo Ube2f un nodo utile per studiare la disregolazione dell’omeostasi proteica in contesti rilevanti per il cancro e per la neurobiologia. Nei modelli murini, Ube2f viene quindi spesso analizzato per collegare le dinamiche della via di NEDD8 a cambiamenti nell’ampiezza della segnalazione e nella degradazione selettiva delle proteine.
UBE2F Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ube2f nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ube2f. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ube2f. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ube2f interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.