TrkB Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400142-LAC

NTRK2 codifica per il recettore tirosin-chinasico TrkB, un recettore ad alta affinità per le neurotrofine BDNF e NT-4/5 che regola la sopravvivenza neuronale, la differenziazione, la plasticità sinaptica e il rimodellamento dei circuiti dipendente dall’attività. In seguito al legame con il ligando, TrkB attiva le cascate di segnalazione canoniche PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK e PLCγ–Ca2+, coordinando programmi trascrizionali e dinamiche del citoscheletro che modellano la crescita dei neuriti e la funzione sinaptica. Una deregolazione della segnalazione NTRK2/TrkB è stata associata ad alterazioni del neurosviluppo e a fenotipi neuropsichiatrici, e un’attività o un’espressione recettoriale aberranti sono state studiate in tumori in cui è coinvolta la via delle neurotrofine. In quanto nodo che integra segnali extracellulari mediati da neurotrofine con la segnalazione intracellulare chinasi, TrkB è ampiamente utilizzato per indagare il crosstalk tra vie, la connettività neuronale e output di segnalazione specifici del contesto in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale TrkB (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NTRK2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TrkB (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NTRK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TrkB. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NTRK2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.