Trk C Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400854-LAC

NTRK3 codifica il recettore tirosin-chinasico Trk C, un recettore ad alta affinità per la neurotrofina-3 che regola la sopravvivenza neuronale, la differenziazione, la guida assonale e la plasticità sinaptica. In seguito al legame con il ligando e all’autofosforilazione, Trk C attiva le cascate di segnalazione canoniche, tra cui MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ–PKC, coordinando programmi trascrizionali e la dinamica del citoscheletro. L’attività di NTRK3 influenza i processi di neurosviluppo e il mantenimento dei circuiti neurali, e la deregolazione della segnalazione della famiglia Trk è stata implicata in contesti quali il rimodellamento di vie oncogeniche e alterazioni della funzione neuronale. In quanto nodo di via che integra segnali trofici con reti di chinasi a valle, NTRK3 è ampiamente studiato in modelli di specificazione delle linee neurali, trasduzione del segnale e perturbazioni di segnalazione associate a patologie.

Le particelle di attivazione lentivirale Trk C (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NTRK3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Trk C (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NTRK3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Trk C. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NTRK3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.