TRF2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423340

Panoramica

Il gene murino Terf2 codifica il fattore 2 legante le ripetizioni telomeriche (TRF2), un componente centrale del complesso shelterin che si lega al DNA telomerico a doppia elica e promuove la formazione del t-loop per proteggere le estremità dei cromosomi. TRF2 sopprime l’attivazione inappropriata della risposta al danno al DNA dipendente da ATM e limita le fusioni cromosomiche estremità-a-estremità impedendo il non-homologous end joining (NHEJ) ai telomeri, sostenendo così la stabilità del genoma e una corretta progressione del ciclo cellulare. L’alterazione della funzione di TRF2 induce il de-capping telomerico, stress replicativo e aberrazioni cromosomiche, processi rilevanti per la biologia dell’invecchiamento, l’attrito delle cellule staminali e la ricerca sulla tumorigenesi. Terf2 è quindi ampiamente utilizzato come strumento per studiare le vie di mantenimento dei telomeri e il dialogo tra telomeri, riparazione del DNA e segnalazione dei checkpoint.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRF2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Terf2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Terf2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Terf2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRF2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Terf2 per lo studio della segnalazione di TRF2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Terf2 critici per la funzione di TRF2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Terf2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Terf2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRF2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRF2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Terf2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Terf2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.