TR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423489

Panoramica

Nr2c1 nel topo codifica il recettore nucleare orfano TR2, un fattore di trascrizione a specificità di sequenza che si lega agli elementi di risposta ormonale e modula programmi di espressione genica legati alle decisioni sul destino cellulare. TR2 partecipa alle vie di segnalazione dei recettori nucleari e alle reti di coregolatori trascrizionali che influenzano differenziamento, proliferazione e omeostasi metabolica, con ruoli di rilievo riportati nello sviluppo delle cellule germinali e nei circuiti regolatori associati alla pluripotenza. Attraverso queste funzioni trascrizionali, NR2C1 può influenzare lo stato della cromatina e i percorsi di impegno di linea, spesso alterati nelle anomalie dello sviluppo e nella disregolazione trascrizionale correlata al cancro. Di conseguenza, Nr2c1 è un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di regolazione genica alla base di stati “stem-like” e della differenziazione specifica di tessuto in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TR2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nr2c1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nr2c1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nr2c1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nr2c1 per lo studio della segnalazione di TR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nr2c1 critici per la funzione di TR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nr2c1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nr2c1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TR2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TR2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nr2c1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nr2c1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.