TP53INP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405261-ACT

TP53INP2 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2) è una proteina sensibile allo stress implicata nella regolazione dell’autofagia e del traffico intracellulare, con ruoli descritti nell’organizzazione della biogenesi degli autofagosomi e nel supporto di programmi di autofagia selettiva. È stata associata allo shuttling dal citoplasma al nucleo e a interazioni con il macchinario dell’autofagia, collegando le risposte allo stress associate a p53 al rimodellamento catabolico. Attraverso queste funzioni, TP53INP2 può influenzare l’omeostasi cellulare in condizioni di deprivazione di nutrienti e di altri stress, incidendo su vie che regolano sopravvivenza, metabolismo e controllo di qualità. L’autofagia deregolata e la segnalazione di stress che coinvolgono TP53INP2 sono rilevanti per studi meccanicistici in biologia del cancro, neurodegenerazione e fenotipi infiammatori in cui proteostasi e adattamento metabolico risultano perturbati.

TP53INP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TP53INP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TP53INP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TP53INP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TP53INP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TP53INP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TP53INP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TP53INP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TP53INP2 nelle cellule tumorali con espressione di TP53INP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.