Topo IIIαCRISPR激活质粒(h): sc-404439-ACT

TOP3A 编码 DNA 拓扑异构酶 IIIα（Topo IIIα），属于 I A 型拓扑异构酶，在 DNA 复制与修复过程中负责缓解 DNA 拓扑应力并处理重组中间体。Topo IIIα 与 BLM 解旋酶、RMI1 和 RMI2 共同组成 BTRR 复合体，能够溶解双 Holliday 连接体（double Holliday junctions），抑制异常的交叉互换事件，从而促进基因组稳定性。通过参与同源重组、复制叉重启以及缠结 DNA 的去连环（decatenation）等过程，TOP3A 有助于维持正确的染色体分离，并参与线粒体 DNA 的维护。该网络一旦受损，会与姐妹染色单体交换增加及基因组不稳定等表型相关，这些表型与癌症生物学以及遗传性基因组维护障碍疾病密切相关。

Topo IIIα CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TOP3A的表达。

Topo IIIα CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TOP3A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TOP3A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Topo IIIα表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TOP3A位点，并能够研究内源性位点上依赖于Topo IIIα的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TOP3A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Topo IIIα通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。