TMPRSS4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416288-ACT

TMPRSS4 (serina proteasi transmembrana 4) è una serina proteasi transmembrana di tipo II espressa sulla superficie cellulare, dove può modulare la proteolisi pericellulare, il rimodellamento della matrice extracellulare e il comportamento delle cellule epiteliali. Influenzando la segnalazione attivata da proteasi e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice, TMPRSS4 è collegata a processi quali migrazione, invasione e transizione epitelio–mesenchimale. Un’alterata espressione di TMPRSS4 è stata riportata in molteplici contesti di tumori solidi ed è spesso associata a fenotipi aggressivi e a potenziale metastatico, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici dei programmi legati all’invasione. TMPRSS4 è inoltre rilevante per la ricerca sulle reti di proteasi ancorate alla membrana che regolano il processamento dei recettori e la segnalazione a valle nei tessuti epiteliali.

TMPRSS4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMPRSS4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMPRSS4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMPRSS4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMPRSS4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMPRSS4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMPRSS4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMPRSS4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMPRSS4 nelle cellule tumorali con espressione di TMPRSS4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.