TLE2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423413

Panoramica

Tle2 codifica il corepressore trascrizionale TLE2, una proteina della famiglia Groucho/TLE che funge da piattaforma per l’assemblaggio di complessi di cromatina repressivi, modulando programmi di espressione genica dipendenti dal contesto durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. TLE2 interagisce con fattori di trascrizione specifici per sequenza e integra segnali provenienti da vie tra cui Wnt/β-catenina e Notch, influenzando le decisioni di destino cellulare, la differenziazione e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici. In modelli murini e in sistemi cellulari, un’attività alterata di TLE2 può perturbare la specificazione di linea e il controllo della proliferazione, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi alla base di reti trascrizionali deregolate nei disturbi dello sviluppo e nelle vie associate al cancro. Le sue funzioni nucleari di corepressore lo rendono inoltre un nodo utile per analizzare la regolazione epigenetica e la dinamica della repressione trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tle2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tle2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tle2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLE2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tle2 per lo studio della segnalazione di TLE2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tle2 critici per la funzione di TLE2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tle2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TLE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tle2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLE2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TLE2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tle2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tle2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.