TIM-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431363

Panoramica

Havcr2 codifica il recettore immunoregolatore TIM-3, una proteina di membrana di tipo I espressa in molteplici linee immunitarie, tra cui cellule T attivate, cellule T regolatorie, cellule dendritiche e sottopopolazioni dell’immunità innata. TIM-3 integra segnali che definiscono le soglie di attivazione delle cellule T, la tolleranza e la differenziazione effettrice, influenzando la produzione di citochine e la funzione della sinapsi immunologica nel contesto della stimolazione antigenica. Attraverso interazioni con ligandi quali galectina-9 e fosfatidilserina, TIM-3 contribuisce a vie associate alla disfunzione delle cellule T e all’esposizione antigenica cronica, collegandosi ai programmi di esaurimento immunitario e alla modulazione dei circuiti infiammatori. Nei modelli murini, la biologia di Havcr2/TIM-3 è ampiamente studiata in contesti di autoimmunità, infezioni croniche e immunologia dei tumori per comprendere l’omeostasi immunitaria e l’infiammazione specifica dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIM-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Havcr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Havcr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Havcr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIM-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Havcr2 per lo studio della segnalazione di TIM-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Havcr2 critici per la funzione di TIM-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Havcr2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TIM-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TIM-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Havcr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TIM-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TIM-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Havcr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Havcr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.