Thy-1/CD90 Plasmide Double Nickase (m): sc-423390-NIC

Thy1 codifica la glicoproteina di superficie Thy-1/CD90 ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI), un marcatore conservato di neuroni, fibroblasti, cellule stromali mesenchimali e di sottopopolazioni di linfociti T nel topo. Thy-1 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice tramite partner di legame quali integrine e sindecani, influenzando la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e la meccanotrasduzione. Attraverso questi processi modula l’accrescimento dei neuriti, la guida assonale e l’attivazione delle cellule immunitarie, collegando la segnalazione di Thy-1 al rimodellamento tissutale e a segnali infiammatori. Una disregolazione dell’espressione di Thy-1 è stata associata ad attivazione stromale di tipo fibrotico, neuroinfiammazione e fenotipi del microambiente tumorale, rendendolo rilevante per studi sulla segnalazione dipendente dall’adesione e sull’identità di linea cellulare.

Thy-1/CD90 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Thy1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Thy1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Thy1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Thy1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.