TGIF2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416231-ACT

O TGIF2 humano (TG-interacting factor 2) codifica um regulador transcricional homeobox da classe TALE que modula programas de expressão gênica que controlam decisões de destino celular, proliferação e diferenciação. O TGIF2 atua principalmente como um correpressor transcricional ao interagir com proteínas SMAD e recrutar complexos correpressores, moldando assim as saídas de sinalização de TGF-β/SMAD e redes transcricionais mais amplas do desenvolvimento. Por meio dessas interações, o TGIF2 influencia programas relacionados à transição epitélio–mesênquima, a especificação de linhagens e o controle do crescimento dependente do contexto. A expressão ou atividade desregulada de TGIF2 tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em distúrbios do desenvolvimento e em cânceres, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de regulação gênica dependente de sinalização.

TGIF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGIF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGIF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGIF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGIF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGIF2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGIF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGIF2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGIF2 em células tumorais com expressão de TGIF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.